第三节  测定的标准化及质量控制

    不同的测定方法使脂酶活性值变异很大。有人调查诸多实验室报道的正常人肝素后血浆中的LPL值相差10倍之多。而脂肪组织中的LPL差异更大。

    采用上述各方法时, 测定内变异系数(如同一样本反复测定的可重复性)很小(5%左右)。不同测定间的差异因底物的复杂性而很明显, 高达25%左右。精确测定底物的比放射活性很重要。作为质量控制的手段, 应间常用手工滴定测定部分样本中释放的脂肪酸量, 将其与由放射活性算出的脂肪酸释放量相比较。较可取的办法是每次测定都使用一份标准参考样本, 用它来纠正批间误差。若标准参考样本偏离预定值的25%以上, 就应考虑测定的某一环节出了问题。因为酶的不稳定性, 好的标准较难得。测定LPL时, 多使用-70℃下冻存的脱脂牛奶。测定HL和人体肝素前或肝素后血浆中LPL时, 一批-70℃贮存的人肝素后血浆是最佳的标准参考样本。

    目前用来表达脂酶活性单位有许多种。有人建议采用在25℃、pH8.5时, 每分钟释放1nmol脂肪酸定为1mU脂酶活性。这是目前最为广泛使用的酶活性单位。

    脂酶测定时注意事项:

    1. 在所用的条件下, 底物的量是否达到饱和或接近饱和, 这在不同组织及不同群种之间都会不同。

    2. 底物的消耗水平如何?调整孵育时间和样品体积使任何样本的水解不超过10%。

    3. 既使在最大水解时, 白蛋白的量是否足够与所游离脂肪酸结合?

    4. 测定LPL时, 血清/Apo CII的量是否适合? 少量加入时, 所有血清都有剌激作用。但有些血清加入过多时会使酶活性降低。应避免使用这类血清。

    5. 测定值与时间是否成线性关系? 若不是, 改变温度和pH使酶活性保持稳定。

    6. 测定值与酶量是否成线性关系? 若不是, 检查酶制品中是否有任何产生抑制作用的成分(如组织蛋白, 去垢剂), 其浓度是多少? 使用小份量的酶制品来避免这一误差。

     7. 酶保持数分钟、数小时或数天后是否仍然稳定。